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公祭仪式在侵华日军南京大屠杀遇难同胞纪念馆集会广场举行。现场庄严肃穆，国旗下半旗。约8000名各界代表胸前佩戴白花，默然肃立。10时整，公祭仪式开始，奏唱中华人民共和国国歌。国歌唱毕，全场向南京大屠杀死难者默哀，南京市拉响防空警报，汽车停驶鸣笛，行人就地默哀。默哀毕，在解放军军乐团演奏的《国家公祭献曲》旋律中，解放军仪仗司礼大队16名礼兵抬起8个花圈，敬献于公祭台上。

李书磊指出三期必出一期三期必开一期香港，我们举行国家公祭，就是要宣示牢记历史、不忘过去，珍爱和平、开创未来的坚定立场，展现新时代中国共产党和中国人民继承先烈遗志，书写强国建设、民族复兴新篇章的坚强决心。我们要凝聚团结奋斗、攻坚克难的力量，发扬自信自立、改革创新的精神，坚定守护和平、维护正义的追求。铭记历史是为了更好前行。让我们更加紧密地团结在以习近平同志为核心的党中央周围，万众一心，奋发有为，为以中国式现代化全面推进强国建设、民族复兴伟业而努力奋斗，为人类和平和发展的崇高事业作出更大贡献。

参加过抗日战争的老战士老同志代表，中央党政军群有关部门和东部战区、江苏省、南京市负责同志，各民主党派中央、全国工商联负责人和无党派人士代表，港澳台同胞代表，为中国人民抗日战争胜利作出贡献的国际友人或其遗属代表，南京大屠杀幸存者及遇难同胞亲属代表三期必出一期三期必开一期香港，国内外相关主题纪念（博物）馆代表，国内有关高校和智库专家代表，中日韩宗教界代表，驻宁部队官兵代表，江苏省各界群众代表等参加公祭仪式。